提到DNA連接酶，大家第一反應(yīng)都是T4 DNA連接酶（參見探秘T4連接酶：基因的“分子縫合針”）。但其實(shí)DNA連接酶還有很多類型，分別針對(duì)不同的DNA模板，發(fā)揮不同的作用。今天，我們就來了解另一種重要的DNA連接酶——高保真Taq DNA連接酶。
Taq DNA連接酶來源于嗜熱菌，以NAD為輔助因子，主要功能是連接DNA雙鏈上切刻（nicking）缺口，而不是雙鏈之間的缺口，因此Taq DNA連接酶不是T4 DNA連接酶的替代品。Taq DNA連接酶要求切刻兩側(cè)的兩條DNA鏈與互補(bǔ)靶DNA鏈完全配對(duì)，且切刻缺口上不能有缺失的堿基。連接產(chǎn)物可以通過毛細(xì)管電泳、熒光定量PCR或高通量測(cè)序等手段來進(jìn)行分析。Taq DNA連接酶尤其適用于依賴于缺刻連接的分子診斷反應(yīng)，例如連接酶檢測(cè)反應(yīng)（LDR）、多重連接依賴式探針擴(kuò)增（MLPA）等。
但是，普通Taq DNA連接酶的保真度有限。當(dāng)缺口處存在錯(cuò)配的情況下，普通Taq DNA連接酶的連接效率仍然偏高，容易出現(xiàn)假陽性結(jié)果。為了解決這個(gè)問題，愚公生物通過突變改造，獲得了高保真的HiFi Taq DNA Ligase，大幅降低了錯(cuò)配的連接率。
每行為不同的單鏈底物，每列為缺口連接處序列不同的探針。分別用HiFi Taq DNA Ligase和普通Taq DNA Ligase在55℃下反應(yīng)30 min后檢測(cè)連接產(chǎn)物。結(jié)果表明，當(dāng)連接處存在錯(cuò)配時(shí)，HiFi Taq DNA Ligase的連接效率顯著低于普通Taq DNA Ligase，表明HiFi Taq DNA Ligase的保真度更高。
與進(jìn)口高保真Taq DNA連接酶相比，愚公HiFi Taq DNA Ligase的保真度也不遑多讓。采用類似的方法檢測(cè)，愚公HiFi Taq DNA Ligase在大多數(shù)錯(cuò)配位點(diǎn)上的表現(xiàn)都優(yōu)于進(jìn)口產(chǎn)品。
多重連接依賴式探針擴(kuò)增(Multiplex ligation-dependent probe amplification, MLPA)是2002年出現(xiàn)的一種中通量的分子診斷技術(shù)，可以同時(shí)檢測(cè)數(shù)十個(gè)基因組DNA位點(diǎn)的拷貝數(shù)目變化（CNV）或單核苷酸多態(tài)性（SNP），其檢測(cè)尺度可以從單堿基到整條染色體，還可以用于檢測(cè)DNA甲基化。因此，MLPA被廣泛應(yīng)用于遺傳學(xué)研究和臨床診斷領(lǐng)域，其中的核心工具酶就是高保真DNA連接酶。
有客戶詳細(xì)對(duì)比了多種高保真Taq DNA連接酶在MLPA檢測(cè)中的實(shí)際表現(xiàn)，愚公HiFi Taq DNA Ligase的綜合性能顯著優(yōu)于某進(jìn)口產(chǎn)品。
